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以N-糖基化提高畢赤酵母重組表達(dá)β-葡萄糖醛酸苷酶（PGUS-P）的熱穩(wěn)定性為目的,在PGUS-P模擬結(jié)構(gòu)分析的基礎(chǔ)上,半理性方法設(shè)計(jì)并通過(guò)定點(diǎn)突變引入具有EAS（enhanced aromatic sequence）序列特征的新N-糖基化位點(diǎn),經(jīng)畢赤酵母重組表達(dá)后,獲得了3個(gè)新糖基化的突變酶PGUS-P-26、PGUS-P-35和PGUS-P-259。反應(yīng)動(dòng)力學(xué)分析表明,與原始PGUS-P相比,突變酶PGUS-P-26、PGUS-P-35和PGUS-P-259催化甘草酸水解的Km變小,Kcat/Km增加,表明其對(duì)底物甘草酸的親和力和催化效率均得到提高。熱穩(wěn)定性分析表明,PGUS-P-35和PGUS-P-259的熱穩(wěn)定性得到改善,在65℃下保溫90 min,其熱穩(wěn)定性相對(duì)PGUS-P分別提高了13%和11%。研究表明在蛋白質(zhì)的合適位點(diǎn)引入糖基修飾對(duì)提高蛋白的熱穩(wěn)定性具有促進(jìn)作用。
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目的:研究珍珠梅水提取物對(duì)D-半乳糖所致大鼠急性肝損傷的防護(hù)作用。方法:50只大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、大和小劑量給藥組、陽(yáng)性對(duì)照組5個(gè)組。給藥組按10g/kg、5g/kg劑量以珍珠梅水提取物灌胃;陽(yáng)性對(duì)照組按0.2g/kg劑量以聯(lián)苯雙酯灌胃;正常組、模型組以等體積生理鹽水灌胃;共5天。第4天,模型組和給藥組按0.5g/kg劑量腹腔注射D-半乳糖,正常組腹腔注射等體積生理鹽水。腹腔注射D-半乳糖24小時(shí)后,摘眼球取血,用比色分析法測(cè)定大鼠血清AST、ALT的活性,血清和線粒體超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathione perioxidase,GSH-PX)的活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量。結(jié)果:珍珠梅水提物顯著降低因D-半乳糖所引起的大鼠血清ALT、AST的升高;對(duì)血清SOD、GSH-PX活性有明顯的升高作用;對(duì)MDA含量有降低作用。結(jié)論:珍珠梅水提物對(duì)D-半乳糖所致大鼠急性肝損傷有防護(hù)作用。
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